الأحد، 22 أبريل، 2012

طريقة الاليزا (ELISA)

طريقة الاليزا (ELISA)

( Enzyme linked immunsorbent assay)

طريقة الاليزا:-
تستخدم هذه الطريقه بصورة كبيرة فى تحاليل المناعة والهرمونات وكذلك الفيروسات.
فكرة الاختبار:-
تعتمد فكرة هذه الطريقة على معلومة هامة فى علم المناعة وهى فكرة المناعة المتخصصة والتى تتلخص فى أنه عند دخول جسم غريب الى جسم الانسان (فيرس معين مثلا ) يقوم جهاز المناعة بتكوين أجسام مضادة مناعيه ضد انتيجينات هذا الجسم الغريب وتظل موجودة فى الجسم فيما يسمى الذاكرة المناعية , تكون هذه الاجسام المضادة خاصة للأنتيجين الذى تكونت من أجلة فقط ومن هنا تأتى الفكرة فعندما نريد أن نبحث عن انيجين أو فيرس معين فى عينة لشخص ما نأتى بالاجسام المضادة المتخصصة له فترتبط به والعكس صحيح.


شرح طرق القياس الكيميائى ( طريق الاليز) وهما طريقتان:-

أولا الطريقه المباشرة (Direct Elisa) :-احدى الطرق التى تستخدم لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة (اى الميكروب نفسه)
ثانيا الطريقه الغيرمباشرة(InDirect Elisa) :- وهى تحديد نسبة أجسام مضادة فى العينة. (مضادات الميكروب)


* طريقة الاليزا المباشرة Direct Elisa
فى الاليزا عادة نستخدم أطبافق الاليزا وهو طبق مكون من صفوف وكل صف مكون من 8 ويلات (نقرات) وعاة يكون الطبق 96 ويل


فى الطريقة المباشرة نبحث عن أنتجين مجهول
2- تكون جدران الويلات مغطاة بالاجسام المضادة الخاصة بالانتيجين المراد الكشف عن وجودة
3- عند اضافة العينة الى الويل تقوم الاجسام المضادة الموجودة على جدران الويل بالارتباط بالانتيجن اذا وجد فى العينة
4- يتم غسيل الويل للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة والانتيجنات الاخرى الغريبة ويتبقى الانتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود على جدار الويل
(antibody antigen complex) يسمى الجسم المضادالمرتبط بالانتجين (معقد الانيجين والجسم المضاد




- يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل هذا الجسم المضاد الثانى مع معقد الانتيجين والجسم المضاد
- تكرر عملية الغسيل مرة أخرى للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة
- يتم اضاف الخطوة الاخيرة وهو مركب (substrate or tmb) يقوم الانزيم المرتبط فى الجسم المضاد الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لون.
بعد ذلك يتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى (Stop solution)
يتم القراءة على جهاز قراءة الاليزا عند الطول الموجى المناسب

تتناسب قوة امتصاص هذا اللون مع تركيز الانيجين المجهول فى العينةويأتى مع كل كيت اليزا عدة استاندرات- محاليل قياسيه (6 غالبا) بتركيزات متدرجة معلومة يتم عمله مع الاختبار المطلوب ثم يتم رسم منحنى قياسى يمثل
العلاقة بين قوة التركيزconcentration الامتصاصabsorbance
ويتم حساب النتائج من هذا المنحنى.
* طريقة الاليزاغير المباشرة In Direct Elisa
نفس خطوات الاليزا المباشرة ولكن فى هذه الطريق نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة فتكون العكس جدران الويلت مغطاة بالانتيجنات الخاصة بالاجسام المضادة المراد الكشف عنها وباقى الخطوات هى نفسها ولعل اشهر الامثلة لهذا النوع الاليزا الخاصة بالكشف عن الاجسام المضادة بفيروس (C الكبدى).

أنواع الاختبارات لفحص الايدز
ان أكثر اختبارات الأجسام المضادة شيوعا هو اختبار ELISA و اختبار Rapid test، أما اختبار Western Blot أقدر على تشخيص حالة عدم الإصابة بالفيروس من غيره من الاختبارات إلا انه أيضا أكثر كلفة. في مصر تستخدم المعامل المركزية اختبارات ELISA كاختبارات أولية ثم اختبار Western Blot لتأكيد النتائج .
اختبارات الأجسام المضادة:هذا النوع من الاختبارات يكشف عن الأجسام المضادة مثلا لفيروس مثل المسبب لنقص المناعة البشريه الايدز و لا يكشف عن وجود الفيروس نفسه، فعندما يغزو فيروس(الإيدز) المسبب نقص المناعة البشرى الجسم يدخل في خلايا CD4 اللمفاوية و هي إحدى فئات كرات الدم البيضاء، فيرد جهاز المناعة على هذا الغزو بإنتاج الأجسام المضادة لمحاربة العدوى ، و تعتمد اختبارات الأجسام المضادة على الكشف عن وجود هذه الأجسام كدليل على وجود الفيرس.

‏ليست هناك تعليقات:

إرسال تعليق